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C18液相色譜柱壞了?那是你沒有保護好

更新時間:2019-05-07  |  點擊率:2116
   C18液相色譜柱壞了?那是你沒有保護好
  C18液相色譜柱是基于溶質、極性流動相和非極性固定相表面間的疏水效應建立的一種色譜模式,任何一種有機分子的結構中都有非極性的疏水部分,這部分越大,一般保留值越高,在液相色譜中這是應用面較廣的一種分離模式,在生物大分子的反相液相色譜條件下,流動相多采用酸性的、低離子強度的水溶液,并加一定比例的能與水互溶的異丙醇、乙腈或甲醇等有機改性劑,大量使用的填料為孔徑在30納米以上的硅膠烷基鍵合相,除此之外,也有少量高聚物微球。
  在液相色譜柱的使用中,我們會發(fā)現(xiàn)很多實驗室會面臨C18液相色譜柱頻繁損壞的問題。那么,我們該如何預防呢?
  1、在液相系統(tǒng)中加入在線過濾器
  在線過濾器的內部顆??障兑话闶?.5微米,對于UHPLC會選擇0.2微米空隙的在線過濾器。這個空隙尺寸和柱頭的過濾篩板尺寸接近或者略小。所以,在線過濾器能夠有效的阻隔來自樣品、泵頭密封墊、自動進樣器的轉子密封墊的顆粒物,以防止柱頭過濾篩板的堵塞。
  注意:但是對于非常低死體積的液相系統(tǒng),在線過濾器的加入可能會導致系統(tǒng)死體積增大峰展寬變嚴重的問題。而對于大多數(shù)的液相系統(tǒng)而言,色譜圖不會有太大變化。
  2、在C18液相色譜柱前端使用保護柱
  保護柱有很多種,通用型、一體式、卡套式,但是它其實是一個和分析柱固定相相同的10-20mm的小柱子。因為它具有和分析柱相同的內部填料,所以保護柱不僅可以阻隔顆粒物,還可以阻隔易吸附的樣品基質組分。
  注意:由于保護柱中可能有大量的強保留組分,在用強溶劑清洗系統(tǒng)時請取下保護柱,以防止這些強保留組分被洗脫進分析柱。保護柱如果出現(xiàn)吸附飽和也可能會對分離效果有影響
  3、對樣品進行凈化處理
  有一些液相的分析方法沒有明確標注樣品的凈化,但我希望大家在使用C18液相色譜柱做分析時都能夠考慮樣品的凈化,常用的方案是對樣品進行過濾。